反复冻融对血浆有什么影响?

我们在进行动物科学和医学相关的基础研究中,血浆是非常常见的生物学样本,为保证结果的可靠性,要尽量减少甚至避免样本的反复冻融。关于样本反复冻融对实验结果的影响,我们已在之前讨论了两期,本期,我们继续通过一篇文献,讨论反复冻融对血浆的影响。

今年3月,Ke Hu等在Journal of Veterinary Internal Medicine杂志发表题为The effect of freeze-thaw cycles on determination of immunoreactive plasma adrenocorticotrophic hormone concentrations in horses的文章,讨论反复冻融对马血浆促肾上腺皮质激素免疫反应性测定的影响。

 

研究背景:血浆促肾上腺激素(ACTH)浓度测定(内源性或促甲状腺素释放激素刺激试验)是马垂体中间部功能障碍(PPID)最常用的诊断试验。由于促肾上腺皮质激素不稳定,样本通常被冷冻,以便运往实验室或对研究样本进行批量分析。然而,反复冻融对马ACTH的影响尚不清楚。

研究目标:探讨探讨反复冻融对免疫反应性ACTH浓度的影响。

研究方法:将马分为4组:第1组,垂体中间部功能障碍(PPID)阴性,无(促甲状腺素释放激素)TRH刺激;第2组,PPID阴性,有TRH刺激;第3组,PPID阳性,无TRH刺激;第4组,PPID阳性,有TRH刺激。在基线时或刺激TRH30分钟采集每匹马的全血。用化学发光法测定血浆ACTH浓度。然后血浆样本在−80下冷冻>24小时,在4℃下解冻,5次冻融循环。用线性混合效应模型分析血浆ACTH浓度的变化。

研究结果:反复冻融(P=0.001)和PPIDP=0.04)对血浆ACTH浓度有显著影响,而TRH刺激对血浆ACTH浓度无显著影响。

 

图 第1组(使用内源性ACTH的无PPIDn=7A)、第2组(TRH刺激后未使用ACTHPPIDn=7B)、第3组(使用内源性ACTHPPIDn=7C)、第4组(TRH刺激后使用ACTHPPIDn=7)的免疫反应性ACTH浓度(基线百分比)的变化,D)。单个马的数据用虚线表示,组平均值用实线表示

 

图 对照组(n=14,黑柱)和PPIDn=14,灰柱)组在5个冻融循环中免疫反应性ACTH浓度(基线百分比)的平均值和标准差

结论:反复冻融可改变血浆ACTH浓度,且在患有PPID的马身上更快地观察到这种影响。为诊断PPID,在测定血浆ACTH浓度时应避免反复冻融。

本文讨论了反复冻融对马血浆中ACTH浓度的影响,证实反复冻融会对检测结果造成影响。对于其他血液类样本,检测其他指标时,可能也会受反复冻融的影响。为尽量获取更为真实的结果,建议不要反复冻融样本。

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