细胞划痕实验经验总结

我是一名科研民工,最近在做细胞划痕实验,虽然是比较简单的实验,但是…..也掉坑里去了,在此,我总结了下失败的经验,希望对大家有帮助。

细胞划痕实验是实验室分析细胞迁移能力的常用方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

我为什么会选择做细胞划痕实验?

1.在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。

2.非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。

3.与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。

4.研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。(划重点)

要准备哪些材料?

要准备的材料不多:细胞样品、6孔板、记号笔、尺子、枪头、试剂、无血清培养基、PBS,所有需要的器材都要灭菌,超净工作台紫外线消毒至少30min。

操作步骤?

中间黑色的划痕区域可以用描绘工具中的魔棒工具来选择。点击irregular AOI→NEW AOI,圈选中间黑色的划痕区域。

接下来开始测量,除了测量面积之外,还可以测量外框长度,也就是划痕的长度,也就是图片的整体高度。点击count/size→measure→select measurements→Box Height(这就是划线的长度)。

点击edit→convert AOI(s) to Object(s) →view→meaurement data。

划痕的平均宽度=Area/Box Height,例如图中数据654727/1200≈545.61

注:一个要注意的问题,随着细胞的不断迁移,划痕会不断缩小,在计算不同时间点划痕宽度的缩小时,不要计算其相除的比例值,而是要计算想减的差值。

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