免疫组化IHC(SABC法)

第一天

1.  二甲苯I: 10min(注意带薄膜手套,橡胶手套可溶于二甲苯)

2.  二甲苯II: 5min

3.  无水乙醇I: 5min

4.  无水乙醇II: 5min

5.  95%乙醇: 1min

6.  90%乙醇: 1min

7.  70%乙醇: 1min

8.  TBS:2x5min

9.  抗原修复:30min(切片放入装有柠檬酸钠的小容器中,后放入蒸锅)

10.冷却至室温(20min)后,蒸馏水:5min

11.3%过氧化氢(新配):10min→30min

12.PBS:3x5min,

13.含1%TritonX-100的TBS(不易溶,稍提前配制):15min(轻轻搅动)

14.免疫组化笔围绕标本画圈(避免液体量过多)

15.5%BSA封闭液3滴:37℃,30min,甩干,勿洗

16.按说明书用TBS稀释的一抗(兔/鼠抗人)孵育:37℃,1-2h/4℃过夜(湿盒)

第二天

1.  恢复室温,蒸馏水:3min

2.  TBS:3x5min

3.  二抗(羊抗兔/鼠)孵育:37℃,30min(延长至1h)

4.  TBS:3x5min

5.  滴加SABC: 37℃,30min(提前30min准备)

6.  TBS:3x5min

7.  DAB显色:1-10min(一旦出现颜色—黄棕色,立即停止显色)

8.  自来水冲洗:2min

9.  苏木精:40s,自来水冲洗,避免染色过深

10.0.5%-1%氨水返蓝:30-60s,显微镜下观察

11.蒸馏水:3x3s

12.75%乙醇: 30s

13.95%乙醇: 30s

14.无水乙醇II:30s

15.无水乙醇I:60s

16.二甲苯I:1min

17.二甲苯II:1min

18.封片,晾干

注意:

1、IHC中,脱蜡前,将切片放在60℃的恒温干燥箱中烘烤4-12小时,或70℃1小时可防止脱片;

2、在实际工作中可以采用蜡封固切片和-20度低温保存组织切片来避免抗原损失,或石蜡组织块4度保存,用时再切片使用,这就可以大大降低抗原丢失率。

3、2X TBS(4℃无限期储存)配方

Tris       2.42g

NaCl      3.51g

加水至200ml(调PH10.5

4、自来水冲洗时,自来水冲手后,流至玻片。

基础实验

实验教程:凋亡细胞的单细胞电泳检测

2020-8-15 16:50:19

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细胞增殖:MTT实验

2020-8-15 16:51:24

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