实验教程:如何识别细胞污染?(下)

在培养细胞过程中,我们最担心的就是细胞污染,因此,今天师姐继上期继续分享如何辨别细胞污染的经验,继续学起来吧~

★识别支原体污染

这是一种很难发现却经常存在的问题。

  • 支原体是最小的(0.3 μm)能够自我复制的有机体,倒置显微镜下通常观察不到。
  • 支原体没有细胞壁,对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的,可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候,才意识到是发生了支原体感染。
  • 在没有采用特殊的染色方法,也没有观察到病变的情况下,实验总是不成功,就应怀疑被支原体污染。预防支原体污染的惟-途径是经常对细胞进行筛选。

★防止支原体感染

  • 只使用那些证明没有污染支原体的血清和培养基。
  • 只接受那些保证没有支原体感染的细胞。

注意:当你怎么样也得不到一种细胞表面蛋白的抗体,或不能有效地表达某种蛋白质时,可能是由于使用了被支原体感染的细胞。

★检测支原体感染

如果这株细胞对你十分重要,那么就应该每4~6周对细胞进行检测,通常使用下面几种方法:

●支原体的荧光染色是最简单、最便宜也是最常用的方法。

●使用支原体的特异引物进行PCR检测。如果实验室具备PCR仪和电泳条件,那么这种方法可能是最简单的手段。可以自己设计引物(设计好恰当的对照),也可以从公司购买引物。

●把细胞样品送到能进行支原体检测的公司检测。这样做虽不如自己检测快(尽管托给公司比较容易,但会很贵),唯一的好处就算是不用自己亲自动手。

注意:如果你发现了支原体污染

●最好的方法是立即把细胞丢弃,从新复苏。

●可以不理会它。

●可以采取某些挽救措施,但是会很困难,只适用于那些不可代替的细胞。最简单的方法是订购除去支原体的试剂盒。

★交叉污染

细胞还可能被别的细胞污染,这种交叉污染可能更广泛,许多实验人员在不经意之间培养、使用和冻存了其他的细胞。

如何避免交叉污染:

●只从有保障的地方得到细胞,或者自已检查细胞。

不要同时操作多株细胞不要把多种培养瓶同时放在超净台内。

●不要使用同一个移液管操作多种细胞。

●不同细胞株不要使用同一瓶培养基或胰蛋白酶。

●操作后不要把移液管放回培养基的瓶中。

●培养维护时,使用栓塞式移液管。

注意:

如果你的细胞生长情况或功能突然发生了变化,在排除支原体污染后,检查你的细胞是否发生了交叉污染(这些变化也可能是发生了突变或漂变)。

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